假阳问题汇总-技术专题

2019-09-05 17:15:33

1、未标记上的荧光微球：微球聚集，周围具有大量的负电荷，当样本爬过金垫，微球随着向上跑，在 T 线位置只要碰到带有正电荷的蛋白，即发生反应，形成假阳线条。解决方法：检查标记过程，BSA 封闭

2、电荷作用：荧光微球带有负电荷，当遇上带有正电荷的蛋白，易发生非特异性结合反应，导致假阳。反应环境为酸性时，已发生此类结合。解决方法：改变 pH 和盐度

3、疏水作用：抗原抗体结合以及和微球结合都需要用到疏水作用力，当反应环境中存在疏水物质时，易和胶体金或抗原抗体通过疏水作用力结合，产生假阳结果，如标本里的一些脂肪，细胞碎片，细菌等等。解决方法：用表面活性剂或亲水聚合物进行处理。

4、硫醇类物质的存在（S-H 键起作用）

5、抗原抗体作用（内源性物质）：此类作用是指标本里面含有能和标记材料/包被材料发生免疫反应的非目标物的其他物质导致的假阳结果。解决方法：在样品垫或金子垫或硝酸纤维素膜上加入相应的抗体，将这类物质在 T 线前消除掉。

①类风湿因子人血清中 IgM、IgG 型类风湿因子(RF)可以与 ELISA 系统中的捕获抗体及酶标记二抗的 FG 段直接结合，从而导致假阳性解决该情况的办法是：(1)用 F(ab)2 替代完整的 IgG；(2)标本用预先热变性(63℃，10min)IgG 的固相吸附剂处理(将热变性 IgG 加入到标本稀释液中同样有效)；(3)检测抗原时，可以用 2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使 RF 降解。

②补体如果在包被和标记过程中，使用的抗体的 FC 段的补体 Clq 分子结合位点被暴露出来，而易使 Clq 可以将补体和抗体二者连接起来，造成假阳性现象。解决的方法是：(1)用 EDTA 稀释标本；(2)用 53℃、10min 加热血清使 Clq 灭活。

③嗜异性抗体人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig(s)结合的天然嗜异性抗体，易和包被和标记的抗体产生反应，能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动物 Ig(s)，但加入量不足或亚类不同时无效。

④医源性诱导的抗鼠 Ig(s)抗体（嗜异性抗体的一种）临床开展的用鼠源性 CD3 等克隆抗体治疗，用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向治疗等新技术，均有可能使些病人体内产生抗鼠抗体；另外，被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠 Ig(s)抗体。解决的方法是：测定抗原时，在标本中加入足量的正常鼠 Ig(s)，从而克服由于上述原因造成的假阳性。为了消除嗜异性抗体的影响，可通过在样品垫中加入正常的动物血清或纯化的鼠 IGg，又或者在膜上喷有鼠 IGg A 线，金子中加有正常的动物血清或纯化的鼠 IGg 等等方式将嗜异性抗体排斥在 T 线前，消除这方面的假阳。

⑤嗜靶抗原的自身抗体抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，ELISA 方法中均可干扰抗原抗体测定结果。解决的办法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。

6、抗凝剂和防腐剂的影响：抗凝剂(如肝素、EDTA、枸橼酸钠)，防腐剂(如 NaN3)因为对离子和蛋白活性的影响，有时会导致假阳的产生。其他原因：血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过高等，均对胶体金测定结果有干扰作用。解决方法：表面活性剂及聚合物的使用，降低粘度，保证正常爬速。

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